Avances del proyecto de implementación de servicio diagnóstico molecular en medicina transfusional

Antecedentes

Con el objetivo de contribuir al mejoramiento de la calidad de vida de familias con coagulopatías congénitas, a través de la instrumentación de herramientas diagnósticas hasta el momento no disponibles en nuestro país, estamos trabajando desde el 2009, en conjunto con la Dirección correspondiente del  Centro Hospitalario Pereira Rossell (CHPR) y el  Instituto Pasteur de Montevideo (IPM), en la implementación del proyecto.

Este Proyecto fue presentado para su financiación inicialmente en el llamado a creación de Unidades Docentes Asistenciales (UDA) en Diciembre de 2008, a la Oficina de Planeamiento y Presupuesto  (OPP) de Presidencia de la República, en Octubre de 2009 y a la Agencia Nacional de Innovación e Investigación en Diciembre de 2009. En Noviembre de 2009, fue aprobado por OPP y desde la fecha participamos en las actividades correspondientes organizadas por este organismo.
Está pendiente aun la evaluación de los proyectos presentados a ANII.

Avances

Los Objetivos Específicos propuestos fueron:

1. Creación de convenio con Laboratorio establecido para implementación de estudios moleculares de Hemofilia A y B
2. Puesta a punto del algoritmo de estudios y análisis para diagnóstico molecular de Hemofilia A y B.
3. Caracterizar el perfil mutacional de la población con Hemofilia en Uruguay.
4. Evaluar Prevalencia de portadoras, y ofrecer asesoramiento genético
5. Estudio de polimorfismos y mutaciones específicos relacionados con el riesgo de desarrollo de inhibidor.

Respecto al Objetivo específico 2, los estudios para Hemofilia A severa implican una primera etapa de evaluación de inversión del intrón 22. En caso que sea negativo se evalúa en la misma muestra inversión del intron 1. Cuando no se detectan estas mutaciones, o si se trata de Hemofilia A moderada/leve o Hemofilia B la búsqueda de la mutación responsable implica un análisis completo de todo el gen.

Hemos completado, la puesta a punto y validación, para detectar la inversión del intron 22 e intron 1.
Los estudios se realizaron en el Instituto Pasteur de Montevideo entre Marzo y Abril de 2010.  
Se procesaron 4 muestras biológicas correspondientes a niños  con Hemofilia, asistidos en nuestra Institución y las mismas muestras fueron enviadas al Departamento de Genética del Instituto de Investigaciones Hematológicas Mariano R. Castex de la Academia Nacional de Medicina de Buenos Aires, en Argentina.
Se instrumentaron las etapas de laboratorio correspondientes a la detección de la invesrión del intrón 22 e inversión del intrón 1 que toman cuenta del 43% de las causas de hemofilia.
Los resultados obtenidos por nuestro equipo fueron coincidentes en 100% con los obtenidos por el equipo de Buenos Aires.
Los insumos utilizados en esta etapa fueron aportados por:

• CHPR: compra de enzima de restricción Bcl-I, insumos para extracción de sangre, papelería y secretaría
• IPM: reactivos para obtención de ADN, ligación y purificación de ADN, PCR, electroforesis en gel de agarosa.
• Aporte personal: compra de primers para realización de PCR.
• Aporte de Laboratorio Bayer para financiar envío de muestras a Buenos Aires

Para resolver los casos negativos para inversión del intrón 22 e intrón 1, es necesario disponer de una cuba de electroforesis vertical de 40 cm de alto, que no dispone el IPM. En diciembre de 2009, se llamó a licitación por parte del Servicio Nacional de Sangre (SNS), para la compra de este equipamiento. Recientemente fueron analizadas las ofertas declarando desierto el llamado por no cumplir con los requisitos necesarios.

Evaluacion del equipo

Hemos cumplido con éxito las etapas de laboratorio para la instrumentación de  estudios moleculares, y hoy, disponemos en nuestro país de la posibilidad de detectar la causa más frecuente de alteración genética que causa Hemofilia, la inversión del intrón 22 ( 42% de la población con la enferemedad) y la inversión del intrón 1 ( 1%).
Sería necesario asegurar la financiación de insumos y de recursos humanos para consolidar el proyecto y avanzar en las gestiones necesarias para incluir este estudio como item par venta de servicios de ASSE

Propuestas de continuación

1. Tomando en cuenta las etapas cumplidas hasta la fecha, consideramos de relevancia avanzar en esta etapa en el convenio con el IPM, para poder cumplir con el pago correspondiente a los insumos ya utilizados y asegurar la cobertura de los mismos en el futuro.
2. Promover el trabajo conjunto con los Servicios del CHPR que la Dirección considere, para transferir las etapas que sean posibles de ser realizadas en los Laboratorios del CHPR y resolver en el IPM sólo aquellas etapas que requieren equipos que el CHPR no dispone.